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GIBCO血清培养乳鼠心肌细胞技术
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发布时间:2024-05-14
GIBCO血清培养乳鼠心肌细胞技术
材料:乳鼠(1-3d)
试剂:DMEM/F12(gibco),FBS(四季青),0.125%混合酶(胰酶和胶原酶1),GIBCO血清
器材:高压包1(眼科剪、镊2套,200目滤网1个),高压包2(消化用小锥形瓶及转子和盖子,9cm平皿1套,100ml烧杯2个),高压包3(小纱布块,细胞计数板),离心管(nunc,15ml,无菌),吸管(一次性单包装无菌,碧云天),酒精棉球,75%酒精1瓶,口罩,帽子,手套,mark笔,离心机,超净台,培养箱,磁力搅拌器(可控温),水浴锅,消化水浴杯(内有300ml双蒸水),卧式染色缸1套(取心用),自制小支架2个(垫平皿用)。
(值得注意的是我所用的装培养基的瓶子都是蓝色丝口瓶,这种瓶子瓶口大,相对来说不容易污染。)
关键词:多次消化,病从口入
步骤:
一、准备
1. 带口罩、帽子,洗手,入培养室
2. 酒精棉球擦拭超净台后,放高压包123和离心管、吸管、酒精棉球缸于超净台内;
3. 放75%酒精1卧式染色缸一套(打开盖)、mark笔于超净台外,放消化水浴杯于磁力搅拌器上(开机,温度37度,转速小于100)在超净台外;
4. 放15%完全培养基和消化酶于水浴锅内(开机,温度37度)
5. 开超净台和培养室紫外30min。
二、30min后
1.带手套,洗净滑石粉,烘干后入培养室,关紫外,开超净台风机,酒精擦手。
2.取4度不完全培养基置于超净台上,取平皿分为两个,每个里面各放一套器械,然后各加不完全培养基8ml,取100ml烧杯一个。将100ml烧杯和其中一个平皿放在超净台外的桌子上,100ml烧杯中倒入75%酒精。
3.拿镊子夹乳鼠,在烧杯中浸泡5-10秒,然后置于杀鼠台上(就是卧式染色缸的盖子),剪刀撕开皮肤,开胸(注意不要损伤消化道),除心包,挤压后取心,直接取心室肌,置于装有4度不完全培养基的平皿中。以此类推,直至全部取完。
4.只将有心肌的平皿放回超净台,酒精擦手。
5.用第2套剪刀先略微剪一下,基本上把每个心脏剪成两半,目的在于先跑跑血。然后,小心移入另一个平皿,简单冲洗后,留下少许液体,猛剪,直到您满意为止。然后再用不完全培养基洗三遍。用吸管移植消化用锥形瓶。
6.加入消化酶10ml,水浴杯内消化10-15min,第一次弃上清;剩余组织中再次加入混合酶继续磁力消化,静置后将上清液移入含15%FBS的DMEM/F12培养基的离心管终止消化,4℃保存;剩余组织用同样方法反复消化,直至消化完全。1 200 r/min离心10 min,弃上清,用培养液制成单细胞悬液,接种于25 cm培养瓶
7. 37度、5% CO2培养箱中孵育1.5 h,吸出细胞悬液离心,细胞计数板计数,调整细胞浓度为1-5×106个/ml后接种于培养瓶和铺有爬片的6孔板。
8. 24h后观察,期间不要看细胞。24h即可见同步搏动了。
三、收拾培养室,写实验记录。
(拜力生物 GIBCO血清 )
材料:乳鼠(1-3d)
试剂:DMEM/F12(gibco),FBS(四季青),0.125%混合酶(胰酶和胶原酶1),GIBCO血清
器材:高压包1(眼科剪、镊2套,200目滤网1个),高压包2(消化用小锥形瓶及转子和盖子,9cm平皿1套,100ml烧杯2个),高压包3(小纱布块,细胞计数板),离心管(nunc,15ml,无菌),吸管(一次性单包装无菌,碧云天),酒精棉球,75%酒精1瓶,口罩,帽子,手套,mark笔,离心机,超净台,培养箱,磁力搅拌器(可控温),水浴锅,消化水浴杯(内有300ml双蒸水),卧式染色缸1套(取心用),自制小支架2个(垫平皿用)。
(值得注意的是我所用的装培养基的瓶子都是蓝色丝口瓶,这种瓶子瓶口大,相对来说不容易污染。)
关键词:多次消化,病从口入
步骤:
一、准备
1. 带口罩、帽子,洗手,入培养室
2. 酒精棉球擦拭超净台后,放高压包123和离心管、吸管、酒精棉球缸于超净台内;
3. 放75%酒精1卧式染色缸一套(打开盖)、mark笔于超净台外,放消化水浴杯于磁力搅拌器上(开机,温度37度,转速小于100)在超净台外;
4. 放15%完全培养基和消化酶于水浴锅内(开机,温度37度)
5. 开超净台和培养室紫外30min。
二、30min后
1.带手套,洗净滑石粉,烘干后入培养室,关紫外,开超净台风机,酒精擦手。
2.取4度不完全培养基置于超净台上,取平皿分为两个,每个里面各放一套器械,然后各加不完全培养基8ml,取100ml烧杯一个。将100ml烧杯和其中一个平皿放在超净台外的桌子上,100ml烧杯中倒入75%酒精。
3.拿镊子夹乳鼠,在烧杯中浸泡5-10秒,然后置于杀鼠台上(就是卧式染色缸的盖子),剪刀撕开皮肤,开胸(注意不要损伤消化道),除心包,挤压后取心,直接取心室肌,置于装有4度不完全培养基的平皿中。以此类推,直至全部取完。
4.只将有心肌的平皿放回超净台,酒精擦手。
5.用第2套剪刀先略微剪一下,基本上把每个心脏剪成两半,目的在于先跑跑血。然后,小心移入另一个平皿,简单冲洗后,留下少许液体,猛剪,直到您满意为止。然后再用不完全培养基洗三遍。用吸管移植消化用锥形瓶。
6.加入消化酶10ml,水浴杯内消化10-15min,第一次弃上清;剩余组织中再次加入混合酶继续磁力消化,静置后将上清液移入含15%FBS的DMEM/F12培养基的离心管终止消化,4℃保存;剩余组织用同样方法反复消化,直至消化完全。1 200 r/min离心10 min,弃上清,用培养液制成单细胞悬液,接种于25 cm培养瓶
7. 37度、5% CO2培养箱中孵育1.5 h,吸出细胞悬液离心,细胞计数板计数,调整细胞浓度为1-5×106个/ml后接种于培养瓶和铺有爬片的6孔板。
8. 24h后观察,期间不要看细胞。24h即可见同步搏动了。
三、收拾培养室,写实验记录。
(拜力生物 GIBCO血清 )
本文链接: http://gibco.immuno-online.com/view-1357627140.html
发布于 : 2024-05-14
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